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(相关资料图)

溶液1配方50 mM葡萄糖，25 mM Tris-HCI, 10 mM EDTA, pH 8.0

1）碱裂解法：溶液I的作用首先要控制好Tris-HCl溶液的pH和浓度；50 mM葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。

2）葡萄糖：如果溶液I中缺了葡萄糖是对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。

3）在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA：是要把大肠杆菌细胞中的Ca2+和Mg2+等所有二价金属离子都螯合掉，抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。

4）如果不加EDTA，也没太大影响，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。

5）注意：菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。

02

溶液II配方：0.2M NaOH，1%SDS

1）溶液II这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。

2）要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH，是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。

3）因为破碎细胞主要是碱的作用，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。

4）用了不新鲜的0.4 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌，自然就难高效率抽提得到质粒；加SDS是为下一步操作做铺垫。

5）这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。